慢病毒(Lentivirus)载体是以HIV-1(人类免疫缺陷I型病毒)为基础发展起来的基因表达载体,可以将外源基因有效地整合到宿主染色体上,达到持久性稳定表达的效果。慢病毒载体可有效地感染神经元细胞、肝细胞、心肌细胞、肿瘤细胞、内皮细胞、干细胞等多种类型的细胞,因此具有广阔的应用前景。
今发展生物推出的慢病毒包装技术是通过共转染六质粒载体制备高效重组慢病毒,与当前市场上的三质粒或四质粒法相比,病毒颗粒的包装效率显著提高(>25倍)。一般情况下,包装好的病毒原液滴度大于10^7 TU/ml,可直接用于各种体外细胞实验,也可进一步浓缩后用于体内动物实验。
u 表达载体:分组成型和诱导型两类,可表达目的蛋白,miRNA或者shRNA;
u 包装质粒:由5个载体按特定比例混合的第四代包装质粒;
u 293T 细胞:专门用于慢病毒的包装;
u 转染试剂: HFect293属于293细胞特有的转染试剂,具有细胞毒性低、转染效率高切稳定等显著优点,特别适合于包装各类病毒;
u Polybrene:有助于提高病毒感染细胞的能力。
u 包装容量大:包装容量可以达到6kb;
u 宿主范围广:可以广泛感染分裂和非分裂的哺乳动物细胞;
u 病毒滴度高:与第四代包装质粒匹配,病毒原液滴度>107 pfu/ml;
u 筛选速度快:一周内即可获得稳定表达特定基因的多种细胞株。
u 感染各种细胞系或原代细胞;
u 组成型或者诱导型表达;
u 过表达目的蛋白基因、shRNA、miRNA、dTuD或者lncRNA;
u 可制备稳转细胞系;
u 可用于转基因动物,特别是转基因大鼠的制备。
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慢病毒表达载体选择:
一)、目的蛋白基因慢病毒过表达载体
Vector Cat# |
FM No. |
Promoter |
Feature |
Stable Selection |
pLVc-100 |
#3563 |
CMV |
cDNA w/o tag |
PKG-Puro |
pLVc-101 |
CMV |
FLAG-cDNA |
PKG-Puro | |
pLVc-102 |
CMV |
HA-cDNA |
PKG-Puro | |
pLVc-103 |
CMV |
cMyc-cDNA |
PKG-Puro | |
pLVc-104 |
CMV |
cDNA-P2A-EGFP |
PKG-Puro | |
pLVc-105 |
CMV |
cDNA-P2A-RFP |
PKG-Puro | |
pLVc-106 |
CMV |
cDNA-EGFP (fusion) |
PKG-Puro | |
pLVc-107 |
CMV |
cDNA-RFP (fusion) |
PKG-Puro | |
pLVc-108 |
CMV |
cDNA-IRES-copGFP |
PKG-Puro | |
pLVi-130 |
TRE3G* |
TRE3G-cDNA-EF1a-TETON3G |
PKG-Puro | |
pLVi-131 |
TETO6* |
TETO6-cDNA-Ubc-rtTA3- |
-IRES-Puro |
*DOX诱导型表达体系
二)、pri-miRNA慢病毒过表达载体
Vector Cat# |
FM No. |
Promoter |
Feature |
Stable selection |
pLVc-200 |
|
CMV |
EGFP-miRNA |
PKG-Puro |
pLVi-201 |
|
TRE3G* |
TRE3G-EGFP.miRNA-EF1a-TETON3G |
PKG-Puro |
pLVi-202 |
|
TETO7* |
TETO7-RFP-miRNA-Ubc-rtTA3- |
-IRES-Puro |
*DOX诱导型表达体系
三)、dTuD (miRNA抑制体) 慢病毒过表达载体
Vector Cat# |
FM No. |
Promoter |
Feature |
Stable selection |
pLVc-210 |
|
U6/H1 |
TuD-U6-H1-TuD-EF1a-copGFP |
PKG-Puro |
pLVc-211 |
|
U6/7sk |
U6-TuD-TuD-7sk- EF1a-copGFP |
PKG-Puro |
pLVc-212 |
|
U6/7sk |
U6-TuD-TuD-7sk |
PKG-Puro |
四)、shRNA 慢病毒干扰载体(mRNA or lncRNA)
Vector Cat# |
FM No. |
Promoter |
Feature |
Stable selection |
pLVc-300 |
|
U6 |
U6-shRNA- EF1a-copGFP |
PKG-Puro |
pLVc-301 |
|
U6/7sk |
U6-shRNA1-shRNA2-7sk- EF1a-copGFP |
PKG-Puro |
pLVc-302 |
|
CMV |
CMV-EGFP-miR30shR |
PKG-Puro |
pLVc-303 |
|
TRE3G* |
TRE3G-EGFP-miR30shR-EF1a-TETON3G |
PKG-Puro |
pLVc-304 |
|
TETO6* |
TETO6-RFP-miR30shR-Ubc-rtTA3- |
-IRES-Puro |
*DOX诱导型表达体系
五)、lncRNA慢病毒过表达载体
Vector Cat# |
FM No. |
Promoter |
Feature |
Stable selection |
pLVc-400 |
|
CMV |
CMV-lncRNA-EF1a-copGFP |
PKG-Puro |
pLVc-401 |
|
CMV |
CMV- lncRNA-EF1a-RFP |
PKG-Puro |
pLVc-402 |
|
TRE3G* |
TRE3G-lncRNA-EF1a-TETON3G |
PKG-Puro |
pLVc-404 |
|
TETO6* |
TETO6-lncRNA-Ubc-rtTA3- |
-IRES-Puro |
*DOX诱导型表达体系
六)、Ca9-sgRNA慢病毒载体
Vector Cat# |
FM No. |
Promoter |
Feature |
Stable selection |
pLVc-500 |
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U6/CMV |
U6-sgRNA-EF1a-FLAG-Cas9 |
PKG-Puro |
pLVc-501 |
|
U6/CMV |
U6-sgRNA-EF1a-HA-Cas9n |
PKG-Puro |
pLVc-502 |
|
U6 |
U6-sgRNA-EF1a-copGFP-PKG-Puro |
PKG-Puro |
pLVc-503 |
|
TRE3G* |
TRE3G-Cas9-EF1a-TETON3G |
PKG-Puro |
pLVc-504 |
|
TRE3G* |
TRE3G-Cas9n-EF1a-TETON3G |
PKG-Puro |
pLVc-505 |
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U6 |
U6-sgRNA-EF1a-Bla-P2A-EGFP |
Bla |
*DOX诱导型表达体系