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深圳市今发展生物科技有限公司

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信号通路表达载体构建

 

Pathway reporter简介:

细胞受到刺激时会做出一系列的反应,包括细胞增殖、分化、凋亡和炎症反应等,转录因子(Transcription factor, TF)在这些过程中发挥核心作用, 检测其活性水平的改变将直接联系到胞内信号通路的状况,有助于揭示细胞反应的分子机制。Geneup公司设计的信号通路报告载体,可以快速灵敏地检测转录因子的活性,对信号通路进行高通量筛选,也可以对特定信号通路进行实时监测。

 

1.普通
质粒表达载体:pTRE-F.Luc

载体特征

1)         在转录调控因子结合位点(TRE)上游插入了人造poly(A)终止信号,可以有效的降低背景;

2)         利用萤火虫荧光素酶基因(Fluc)可对信号活性做出准确的定量分析;

3)         利用Hygromycin抗性基因筛选稳定表达的细胞系。

2. 慢病毒表达载体:pL-TRE-F.Luc

  载体特征:

1)        反向克隆TRE-pA-Fluc.copGFP表达框,可有效减少因LTR启动子造成的背景;

2)        利用萤火虫荧光素酶基因(Fluc)可对信号活性做出准确的定量分析;

3)        通过copGFP绿色荧光标记蛋白可实现对信号通路活性的快速观测;

4)        可以直接转染,也可包装成病毒后感染;

5)         利用Puromycin抗性基因筛选稳定表达的细胞系。