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深圳市今发展生物科技有限公司

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shRNA慢病毒包装

 

慢病毒(Lentivirus)载体是以HIV-1(人类免疫缺陷I型病毒)为基础发展起来的基因治疗载体,可以将外源基因有效地整合到宿主染色体上,达到持久性表达效果。Geneup公司推出的最新一代慢病毒包装技术是通过共转染6个质粒载体制备的高效重组慢病毒,与第二、第三代包装技术相比,病毒滴度得到显著提高(25~50倍),且安全更高。包装好的病毒不用浓缩即可直接用于体外细胞试验,也可进一步浓缩后用于体内动物实验。

系统组成

u  表达载体:分组成型和诱导型两类,可表达目的蛋白,miRNA或者shRNA;

u  包装质粒:由5个载体按特定比例混合的第四代包装质粒;

u  293T 细胞:专门用于慢病毒的包装;

u  转染试剂: HFect293属于293细胞特有的转染试剂,具有细胞毒性低、转染效率高切稳定等显著优点,特别适合于包装各类病毒;

u  Polybrene:有助于提高病毒感染细胞的能力。

系统优势

u  包装容量大:包装容量可以达到6kb;

u  宿主范围广:可以广泛感染分裂和非分裂的哺乳动物细胞;

u  病毒滴度高:与第四代包装质粒匹配,病毒原液滴度>107 pfu/ml;

u  筛选速度快:一周内即可获得稳定表达特定基因的多种细胞株。

应用范围

u  感染各种细胞系或原代细胞;

u  组成型或者诱导型表达;

u  过表达目的蛋白基因、shRNA、miRNA、dTuD或者lncRNA;

u  可制备稳转细胞系;

u  可用于转基因动物,特别是转基因大鼠的制备。

制备流程

lentivirus 1.jpg

shRNA 慢病毒干扰载体(mRNA or lncRNA

Vector Cat#

FM No.

Promoter

Feature

Stable selection

pLVc-300

U6

U6-shRNA- EF1a-copGFP

PKG-Puro

pLVc-301

U6/7sk

U6-shRNA1-shRNA2-7sk- EF1a-copGFP

PKG-Puro

pLVc-302

CMV

CMV-EGFP-miR30shR

PKG-Puro

pLVc-303

TRE3G*

TRE3G-EGFP-miR30shR-EF1a-TETON3G

PKG-Puro

pLVc-304

TETO6*

TETO6-RFP-miR30shR-Ubc-rtTA3-

-IRES-Puro

*DOX诱导型表达体系