S/P RNAiso kit(血清/血浆RNA提取试剂盒,含Spiked-in RNA)
S/P RNAiso kit是本公司自主研发的血清/血浆RNA提取新方法,也适合从尿液、乳汁、唾液或痰液等体液生物样本中提取包括miRNA等小RNA在内的总RNA。本产品使用的核酸助沉剂miRCOP,能有效的提高RNA的得率,从而显著提高体液miRNA定量检测的灵敏性和准确性(图14)。同时,RNAiso试剂中预混的spiked-in cel-miR-54可用作体液miRNA定量检测的内参。本试剂盒在体液miRNA用于疾病早期诊断和预后评估等研究方面有重要价值。本试剂盒亦可用于组织和体外培养细胞包含miRNA在内总RNA的提取。
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图1. 用三种不同提取试剂盒提取血清RNA后, qRT-PCR技术比较RNA的分离效果。
使用方法:
1) 取1 ml miRSOL,加入100 μl体液样本,吹打混匀,室温静置5分钟。
注:样本与miRSOL混合时若产生析出物,应反复吹打至析出物完全溶解,否则会严重降低miRNA回收率。
2) 加入200 μl氯仿,盖紧离心管盖,剧烈振荡20秒(注意防止管盖弹开);
3) 室温静置5分钟。
4) 12,000 g,4℃离心15分钟。小心取出离心管,此时匀浆液分为三层,即:无色的上清液(含miRNA)、中间的白色蛋白层、及有颜色的下层有机相。
5) 吸取500 μl上清液转移至另一新的1.5 ml离心管中(切勿吸出白色中间层)。
6) 向上清液中加入5 μl miRCOP,再加入与上清液等体积的异丙醇(505 μl),上下颠倒充分混匀,-20℃或-80℃静置至少10分钟。
注:当样本是组织或是体外培养细胞时,可不加入miRCOP。
7) 13,500 g,4℃离心10分钟。
8) 弃去上清液,向沉淀中加入1 ml的75%乙醇,轻轻颠倒清洗沉淀。
9) 13,500 g,4℃离心5分钟,完全弃去上清。如管壁上沾有残余溶液,应再次离心并弃尽上清。
10) 沉淀室温干燥2~3分钟,加入23 ul RNase-free水溶解,溶解产物置于-80℃储存,或者直接进行miRNA的荧光定量PCR检测。
注:[1] 溶解的RNA中含有miRCOP,可能对RNA的吸光值有一定干扰,可用RNase-free水代替体液样本同步提取,并作为吸光值测定的空白调零;miRCOP对PCR或荧光定量PCR反应无影响;[2] 为节省样本和简化操作,检测多个样本时建议各个样本取相同体积的RNA进行PCR反应;[3] 提取的血清总RNA中含有spiked-in cel-miR-54,可作为荧光定量PCR的归一化内参;[4] 推荐使用本公司的S-Poly(T) miRNA qPCR-assay试剂盒进行miRNA的荧光定量PCR检测。
名称 | 产品信息 | 规格 | 单价(元) |
S/P RNAiso Kit | 适合血清、血浆、尿液、乳汁、唾液、痰液、粪便抽提上清等样本miRNA的提取 | 25 rxns | ¥1000 |
50 rxns | ¥1,600.00 | ||
200 rxns | ¥4,800.00 |